DNA 甲基化

甲基化BSP检测

用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后再CpG岛两端设计引物进行PCR，将目的产物纯化后进行TA克隆，每个克隆挑取阳性克隆测序，最后将测得的序列与原始序列比对，统计甲基化位点及数量，并分析甲基化程度。BSP（Bisulfite Sequencing PCR，BSP）克隆测序法，是目前甲基化检测的通用方法。

焦磷酸测序

焦磷酸测序（Pyrosequencing）技术是由4 种酶（DNA 聚合酶(DNA polymerase)、ATP 硫酸化酶(ATP sulfurytase) 、荧光素酶(luciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)）催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。每一轮测序反应体系中只加入一种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。如果该dNTP 与模板配对，则会在DNA 聚合酶的作用下，添加到测序引物的3'末端，同时释放出一个分子的焦磷酸(PPi)。掺入的dNTP和释放的PPi 是等量的。CpG 甲基化焦磷酸测序检测法基于引物延伸的Pyrosequencing 技术，通过将链合成过程中释放出的焦磷酸(PPi)转化成光信号来监测链的合成过程。

高通量甲基化测序

结合全基因组Bisulfite处理以及高通量测序技术，采用重亚硫酸盐处理DNA使其未甲基化修饰的胞嘧啶C转化为尿嘧啶U，通过对处理后的DNA进行测序测序，并与参考基因组进行比对，对数据进行生物信息分析。

全基因组甲基化测序（Whole Genome Bisulfite Sequencing，WGBS）

简化甲基化测序(Reduced Representation Bisulfite Sequencing,RRBS)

靶向甲基化测序（Target Bisulfite Sequencing，TBS）